蛋白质检测（六）
蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 1 仪器和设备 塑料盒、振荡器。 2 封闭 一般采用 5% 脱脂奶粉进行封闭，室温， 30-60min 。 * 封闭液的浓度可以是（ 1%-5% ），根据自己的条件摸索浓度就可
免疫组织化学反应结果的判断标准（六）
二、几个需要注意的问题 从上述情况可以看出 , 免疫组织化学结果的判断标准有待于进一步统一 。 当然在判断结果上 , 除了判断标准 , 还有其他一些需要注意的问题。下面谈谈我们的
体外SUMO修饰实验三
3.SUMO 质粒瞬时转染 （1） 将生长状态良好的细胞接种于直径 4-6cm 的培养皿中， 5% CO2 ， 37 ℃培养箱内培养 16-24h ，细胞融合至 60%-90% 时可进行转染。 （2） 转染前 1h 将细胞培养液换成
分子提取方法四
RNA 提取前须知 1、操作中戴口罩和手套 2、 清洁无尘环境中操作，试验台、移液器要用 75% 乙醇擦拭消毒，也可使用 RNase 抑制剂，操作时避免大声喧哗和频繁走动。 3、 玻璃器皿常规洗
分子提取方法（三）
总 RNA 的提取 分子生物学研究中要了解目的基因的存在和表达，可通过提取组织或细胞中的总 RNA 检测该基因的信使 RNA 。总 RNA 的构成是比较复杂，包括核内 RNA 和胞质 RNA ，此外 RNas
蛋白质检测（四）
蛋白印迹法 三 电泳 * 考马斯亮蓝法：用 40% 双蒸水 /10% 醋酸 /50% 甲醇的溶液固定胶中蛋白 考马斯亮蓝 R-250 染色室温染色 4h 过夜，保持摇匀 转入 67.5% 双蒸水 /7.5% 醋酸 /25% 甲醇摇匀脱色
免疫组织化学反应结果的判断标准（五）
二、几个需要注意的问题 从上述情况可以看出 , 免疫组织化学结果的判断标准有待于进一步统一 。 当然在判断结果上 , 除了判断标准 , 还有其他一些需要注意的问题。下面谈谈我们的
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验 （三）
4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤： 1.质粒转染细胞；2. 双报告基因检测； 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 ： (1) 细胞铺板：将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染：
动物细胞转染背景二：
本实验采用带有绿色荧光蛋白极影的质粒，利用脂质体转染人的肿瘤细胞系。绿色荧光蛋白（ GFP ）来源于海洋生物水木，近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋
体外SUMO修饰实验二
2. SUMO 质粒 DNA 的提取 （1） 用 1.5ml 离心管取少量菌液，离心后弃掉上清液。 （2） 用 250ul P1 溶液重悬菌株，漩涡振荡使菌液重新完全悬浮。 （3） 加入 250ulP2 溶液，轻轻涡旋 4-6 次混
