启动子质粒三

二、菌落制备主要环节（四）转化 1、将感受态细胞 DH5ɑ 从 -80 ℃冰箱中取出，立即置于冰中，使其在冰中融化。 2、连接产物加入 DH5ɑ感受态细胞溶液中，轻轻吹打使连接产物分布

分子提取方法7

RNA 提取（一） 1）取出 -80 ℃保存样品，室温，溶解。 2）每 1ml Trizol 加 0.2ml 氯仿，强烈上下混匀，室温。静置 2-3min ，抽提 RNA 。 3）用超速低温离心机 4 ℃， 15000rpm, 离心 15min 。

封片 A. 在显微镜下呈现大量水珠或云雾状改变原因：切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水，导致二甲苯透明，中性树胶封固后残留大量水分。也可能是封片的时候出现的气泡。对策

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 Input 对照：在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ，需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交

探针标记各种不同类型的探针需要经过恰当的标记，才能在原位杂交中应用。 DNA探针一般采用的标记方法为随机引物标记和缺口平移法。寡核苷酸探针则主要采用3＇末端标记。目前标

4. 小鼠的解剖实验： (1) 先解剖已处死小鼠的头部，取出完整的脑部； (2) 用镊子夹住小鼠肚皮上的皮毛，用剪刀剪去皮毛下的腹膜，此时可以看到小鼠腹部的脏器，依次完整的取出肝

二、菌落制备主要环节（三）连接将回收的 PCR 产物连接入 pGL3-Basic 载体中，反应体系如下： T4 连接酶 1uL 5×buffer 1uL 酶切质粒（ 50ng ） _ul 酶切 DNA 片段（ 100ng ） _uL DDW 20uL * 16℃连

2 组织样品处理（1）实验动物组织用手术刀切下 1g 左右，放在冰生理盐水或 PBS 液中洗去血液，滤纸吸去组织表面的水分。（2）小剪刀剪碎组织，加入 1.0-1.5ml Trizol ，组织研磨器或

伊红着色方面： A. 切片中央区域伊红染色不均匀，可能为弱碱性溶液残留导致伊红拒染所致。原因：伊红染液的 pH 值可能大于 5 ；也可能是蓝化液残留过多；切片太薄；或切片经伊

附 2 ：探针的选择与标记（续） 1. DNA 和 RNA 探针其原理是克隆一段特异的 DNA 或 RNA 片段，装载到相应的质粒中。经过质粒扩增，酶解和纯化等步骤，就可以得到大量的 DNA 和 RNA 片段。