启动子质粒(四)
三、 质粒提取 (一) 摇菌培养 1. 将鉴定测序正确的克隆菌液涂在 LB 固体平板。 2. 置于 37 ℃恒温培养箱,培养 12-17h ,待长出菌落。 3. 灭菌 15ml 离心管内加入 5ml 含抗生素的 LB 液体培
体外SUMO修饰实验(四)
4. 带标签的 SUMO 的制备(以 His-SUMO 为例) (1 )培养细胞、诱导及收获。 ( 2 )每 200ml 菌液收获的菌体加入 5ml His 裂解液,重悬沉淀。 ( 3 )冰浴条件下,超声破碎沉淀。 ( 4 )
做微量免疫电泳实验方法
1.首先铺好琼脂板,然后在琼脂板上打孔划槽,在电泳的时候不要把槽中的琼脂挑出来还有在槽的两纵向平行边先不划开。 2.然后就是加样把样品加入到琼脂板的上孔里充满抗原溶液,
HE染色在临床病理诊断中的应用
HE 染色 凡是需要送检的各种组织 , 除了有特殊要求外 , 都要首先固定。固定的目的在于尽量使组织和细胞保持与活体时相似的成份和形态 , 防止组织自溶和细菌性腐败的发生使原有构造
启动子质粒(三)
二、菌落制备主要环节 (四)转化 1、将感受态细胞DH5ɑ从-80℃冰箱中取出,立即置于冰中,使其在冰中融化。 2、连接产物加入DH5ɑ感受态细胞溶液中,轻轻吹打使连接产物分布均匀。
体外SUMO修饰实验(三)
3.SUMO质粒瞬时转染 (1)将生长状态良好的细胞接种于直径4-6cm的培养皿中,5% CO2,37℃培养箱内培养16-24h,细胞融合至60%-90%时可进行转染。 (2)转染前1h将细胞培养液换成不含抗生素
动物体内实验
小鼠体内生物分布实验 二、实验原理 2. 小鼠尾静脉注射练习: 静脉注射时,用小鼠尾静脉注射架固定,先根据动物大小选择好合适的固定架,并打开鼠筒盖,手提鼠尾巴,让动物头对
启动子质粒(二)
二、菌落制备主要环节 (二)双酶切 将PCR回收产物和pGL3-Basic空载体同时进行双酶切。 1.双酶切体系 (1)DNA回收片段酶切的试剂和剂量如下: Xho Ⅰ 1ul Hind Ⅲ 1uL DNA片段(300ng) _uL D
体外SUMO修饰实验(二)
2.SUMO质粒DNA的提取 (8)500ul PB缓冲液,13000rpm 离心30-60s,弃掉滤液。 (9)加入750ul的PE缓冲液,13000rpm离心30-60s,弃掉滤液。 (10)13000rpm再次离心1min,甩干残留液体。 (11)将QIApre
淋巴细胞转化的实验步骤
先取些肝素抗凝血差不多1~2毫升的样子,再用淋巴细胞专用的分离液去分离淋巴细胞;调整细胞浓度为2×103/毫升;再加PHA,使终浓度为1%; 5%放入二氧化碳培养箱内培养48~72小时;然