利用Trizol法提取植物乳杆菌总RNA
一、实验原理 Trizol的主要成分是苯酚,苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的核酸物质得到释放。同时苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此Trizol中还加入了
shRNA干扰载体构建
产品技术背景 pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确
核酸的抽提---mRNA提取分离技巧
与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;AtLeder,1972)。在构建cDNA文库时
Northern blot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电
siRNA对照解析
A.普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照; 2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照; 3.Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成,但是和mRNA没有明显的
Northern blot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III启动子(polIII)中的一种,操纵一段45―50nt的发夹结构RNA(smallhairpinRNA,shRNA)在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA,从而引发基
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNAexpressioncassettes,SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版,能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用,包括一个RNApolⅢ
乙酰胆碱酯酶(AChE)活性发光检测
简介 乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)是一种神经递质,能特异性的作用于各类神经之间胆碱受体。乙酰胆碱参与神经递质过程,在下一次神经冲动开始前乙酰胆碱会被AChE 降解掉。AChE 会被神
DNA的提取 掌握这些就够了
科研朋友讨论了一阵,对一些细菌、真菌 DNA 提取方法,做了总结,现在分享给大家。 细菌 DNA 的提取 方法一: 试剂: 1. 抽提缓冲液 2% CTAB (W/V)、2% PVP K25 (w/v)(去色素)、100 mM Tris-H