细胞中mRNA原位杂交技术（四）
附表 1 ：部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐：三乙醇胺 13.2ml ，氯化钠 5g ，浓盐酸 4ml ， DEPC 水定容至约 1000ml ，临用前，一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ，充分混合。 2
荧光素酶及其报告基因的应用和检测（一）
一 生物发光 生物发光（ bioluminescence ） 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收，而是一种特殊类型的化学发光， 化学能转变为光能的效
细胞中mRNA原位杂交技术（五）
附表 1 ：部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐：三乙醇胺 13.2ml ，氯化钠 5g ，浓盐酸 4ml ， DEPC 水定容至约 1000ml ，临用前，一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ，充分混合。 2
mRNA原位杂交技术四
注意事项： 1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构，最大限度地保存细胞内DNA或RNA的水平，使探针易于进入细胞或组织。DNA较稳定，RNA易被酶解，在RNA定位上，若要使RNA的降解减少
mRNA原位杂交技术三
实验步骤： 二．杂交与显色 1、将加入探针的杂交液先于50℃预热，均匀涂于切片表面，加上硅化盖玻片，放于湿盒中，50℃孵育12-16h。 2、1×SSC（含50%甲酰胺），50℃洗涤2次，每次10m
荧光素酶及其报告基因的应用和检测（六）
中荧光素酶的发光，曝光 10min ， binning3x3 四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下
荧光素酶及其报告基因的应用和检测（三）
三 荧光素酶报告基因 报告基因（ report gene ）是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因，可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验 （三）
4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤： 1.质粒转染细胞；2. 双报告基因检测； 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 ： (1) 细胞铺板：将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染：
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验 （二）
实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒（和元生物
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验
萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则
