S1核酸酶保护实验
一、材料准备 4L5X T4激酶缓冲液 5 l [-32P] ATP(7000次/毫摩尔) 10 l 水+寡核苷酸(200毫微克) 1lT4激酶 1. 37摄氏度1小时 2. 热失活,在75℃下10min。 3. 加入1l糖原(20毫克/毫升),2l4M乙酸铵
RNAi总结
RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。过去几年中,科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、
载体多克隆位点(MCS)改造
加、减、换一个载体 的MCS的位点 (给一个表达 载体加、减、换小表达标签,如His6, His10,strep II等,和MCS改造是一样的),其实技术不是问题,问题在于位点的选择 ,因为载体设计
如何区别siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA
RNA干扰(RNAi),是一种由20多个核苷酸共同组成的较短的双链RNA(siRNA),代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,现在已迅速而广泛地应用到基因功能方面,基因表达调控机制研究等
有关糖代谢
一, 糖除了供能外,还有何功用? 糖类的作用不只是供给生命活动消耗的能量,它也是组织细胞的一种重要组成成分,如 糖蛋白,糖脂,核酸,蛋白聚糖等。 二, 葡萄糖是如何在缺
核糖核酸酶保护分析
一、体外转录 在无菌1.5 ml 微型离心管中,结合以下内容: 4 ul 5倍转录缓冲液 2 ul 0.1 M DTT 4 ul 2.5 MM NTP(A,C,G) 0.8 ul RNA酶抑制剂(25 U/ul)RNA酶抑制剂(Promega)中 100 UM冷UTP 1 ul/ug UL线
层析技术简介
一、层析技术的原理 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成:一是固定相,另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时
酶的载体结合法 交联法 包埋法等固定化方法
酶的固定化方法不下百种,归纳起来大致可以分为三类,即载体交联法、结合法和包埋法。 (一)交联法 交联法是指通过双功能试剂,将酶和酶联结成网状结构的方法。交联法使用的交联
RNA 操作注意事项与实验技巧
操作注意事项: 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功,请仔细阅读下列注意事项,相信它能帮助您解决
CDNA第一条链的合成 (20微升体系)
CDNA第一条链的合成 (20微升体系) 一、按以下顺序加样于500微升EP管中 1. RNA 5 UL 2. Oligo Dt 1 UL 3. dNTP 1 UL (浓度10mM) 4. DEPC水 5UL (为试剂盒中配套的水) 共12UL混匀离心70℃水浴5分钟冰浴2分