siRNA表达框架

   
    siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol III终止位点。与siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆和测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到，耗时不到一天。因此，SECs成为筛选siRNA的最有效工具之一，甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点，那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。
 
    该方法的主要缺点是PCR产物很难转染到细胞中。如果有适合的新型转染试剂能提高SEC的转染效率该问题就可以解决了。另外，没有克隆到载体中的PCR片断并不适于大规模制备。
 
    最适用于：筛选siRNA序列，在克隆到载体前筛选最佳启动子

    不适用于：长期抑制研究。（如果克隆到载体后就可以了）
此文转载：丁香通