cDNA文库组标准流程
第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作: 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部,置于烤箱内,180℃,烤
Protocol for First-strand cDNA Synthesis
Prepare in a sterile tube: template RNA: total RNA 0.1-5µg or poly(A)+ mRNA 10ng-0.5µg, or specific RNA 0.01pg-0.5µg primer: oligo(dT)18 0.5µg or random hexamer 0.2µg, or sequence-specific 15-20pmol, deionized water (nuclease free) up
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值? 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量,请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间(吸光度太高或太低会有较大
PCR的引物设计注意要点
引物(primers): 引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。引物的重要性:在整
总RNA 的非变性电泳检测
总 RNA 的电泳检测,原来我使用 Lambda DNA/EcoR I (或者 Hind III)酶切 Marker,现在基本上不再用 Marker 了。指示剂一定是溴酚蓝加二甲苯氰,胶浓度 1-1.2%。加样后,开始电泳 (电压的选择的
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定
转录因子,研究新时尚
● 转录因子与2012年诺贝尔奖 2012年的诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥,在小鼠成纤维细胞中表达Oct3/4、Sox2、c-Myc以及Klf4四种转录因子,将成纤维细胞逆转形成多能干细胞(iPS),
lncRNA研究策略与技术
研究背景 : 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子,长度在200 bp以上,起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物,不具有生物学功能;近期的研究表明lncRNA具有保
cDNA合成技术
公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采
cDNA文库组标准流程
第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作: 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部,置于烤箱内,180℃,烤