ChIP染色质免疫沉淀技术
Input 对照: 在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ,需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交联, DNA 纯化,以及最后的 PCR 或其他
ChIP染色质免疫沉淀技术
2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ,以便暴露目标蛋白,利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质,容
ChIP染色质免疫沉淀技术
1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质,蛋白质 -DNA ,蛋白质 -RNA 交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对 DNA 和
ChIP染色质免疫沉淀技术
chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目
免疫共沉淀四
RIPA Buffer 配置 1. 基础成分 (1) Tris-HCl (防止蛋白变性的缓冲液成分) (2) NaCl (防止非特异性蛋白聚集的盐分) (3) NP-40 (用 H2O 配置成 10% 储存液。 NP-40 为非离子去污剂,用于
免疫共沉淀三
15. 14000rpm 瞬时离心 5s ,去上清,收集琼脂糖珠 - 抗原抗体的复合物。 16. 用 800ul 预冷 RIPA buffer 冲洗 3 遍。 17. 用 60ul 2 倍上样缓冲液将琼脂糖珠 - 抗原抗体复合物悬起,轻轻敲打混匀。
免疫共沉淀二
具体步骤: 8. 4 ℃, 14000g 离心 15min ,将上清转移到一个新的离心管中。 9. 测定蛋白浓度,可选用 Bradford 法做蛋白标准曲线。 10. 蛋白定量,分装, -20 ℃保存,可保存 1 个月。 11. 用
免疫共沉淀一
具体步骤: 1. 细胞用预冷的 PBS 液洗涤 2 次,最后洗涤完成后吸干 PBS 液。 2. 加入预冷的 RIPA Buffer ( 1ml/107 个细胞、 6cm 培养皿、 75cm2 培养瓶)。 3. 刮留细胞:用预冷的细胞刮子将细
ChIP染色质免疫沉淀技术八
chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目
ChIP染色质免疫沉淀技术七
1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质,蛋白质 -DNA ,蛋白质 -RNA 交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对 DNA 和