ChIP染色质免疫沉淀技术
染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的DNA序列，即ChIP reChIP方法。ChIP reChIP是在第一次ChIP的基础上不解交联，而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀，从而得到与两种目的蛋白都
ChIP染色质免疫沉淀技术
交联反应的逆转和DNA的纯化： 用不含DNase的RNase和Proteinase K，65oC保温6小时逆转交联，经DNA纯化柱回收DNA或用酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化DNA。DNA纯化柱纯化DNA的质量高，有利于下一步PCR等方法
ChIP染色质免疫沉淀技
背景： 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ，简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组
ChIP染色质免疫沉淀技术
染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择： 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时，抗体的抗原表位可能因为与结合
蛋白质检测（五）
蛋白印迹法 四转膜 操作步骤： 1 准备：切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min ， PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 * 转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜，滤纸和膜的尺寸
蛋白质检测一
蛋白印迹法 蛋白印迹（ Western blot, WB ）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法，是将蛋白质通过 SDS-PAGE 电泳后，再转移到杂交膜上，然后通过抗原抗体复合物对
蛋白质检测（七）
蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 4 二抗的处理 （1） 常用二抗： HRP 偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗，但不够灵敏。 （2） 二抗稀释液： PBS/PBS-T 液、 TBS/TBS-T 液、一般的封闭液等
蛋白质检测（十六）
凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤： 5.洗膜 （9） 加入 6mlLuminol/Enhancer Solution 和 6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中，摇匀，作为 Substrate Working Solution 。 （10） 将膜
蛋白质检测（十五）
凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤： 5.洗膜 （1）将封闭液和4倍洗涤液置于37-50℃溶解。 （2）用20ml封闭液封闭尼龙膜，温浴15min，摇船轻摇。 （3）20ml封闭液中加入66.7ul Stabilized S
蛋白质检测（十四）
凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤： 1. 探针的标记 探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒，大约 20bp 。 2. 非变性电泳 （1） 制备 4% 非变性胶 （2） 制备样品 （3） 电泳：预跑胶
