实时荧光定量PCR具体实验步骤

1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到

PCR技术原理、实验步骤和应用

一、实验目的 1. 掌握聚合酶链式反应的原理。 2. 掌握移液枪和 PCR 仪的基本操作技术。二、实验原理 PCR 技术，即聚合酶链反应（ polymerasechain reaction ， PCR ）是由美国 PE Cetus 公司的

逆转录 - 聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ， RT-PCR) 的原理是：提取组织或细胞中的总 RNA ，以其中的 mRNA 作为模板，采用 Oligo （ dT ）或随机引物利用逆转录酶反转录

原位 PCR 是原位杂交细胞定位和 PCR 的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进

重叠延伸PCR技术（gene splicing by overlap extension PCR，简称SOE PCR）由于采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片

一、原理 AFLP 也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测 DNA 多态性的一种 DNA 分子标记技术。但 AFLP 是通过 PCR 反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶

DNA 甲基化是一种表观遗传修饰，它是由 DNA 甲基转移酶（ DNAmethyl-transferase, Dnmt ）催化 S- 腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为 5- 甲基胞嘧啶（ mC ）的一种反应，在真核生物

多聚酶链反应 (polymerase chain reaction ， PCR) 是一种模拟天然 DNA 复制过程，在体外扩增特异性 DNA （或 RNA ）片段的新技术。本实验是将待检双链 DNA 经 94 ℃高温变性成单链作模板，然后加

降落 PCR （ touchdown PCR ），一种 PCR 技术，主要用于 PCR 的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得 PCR 难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使 PCR 效率过低，但退火温

试剂、试剂盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA 引物仪器、耗材热循环仪实验步骤一、材料 1. 酶和酶缓冲液 Taq 聚合酶许多 Taq 聚合酶都可以用；作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多