分子提取方法9

DNA 提取（一）培养细胞 DNA 提取 2 、试剂 PBS 缓冲液、细胞裂解液、蛋白酶 K 溶液、 tris 饱和酚、氯仿、 TE 缓冲液、 RNaseA 、 3M 醋酸钠（ PH 7.4 ）、乙醇等。 3、破碎细胞、释放核酸（

分子提取方法8

DNA 提取（一）培养细胞 DNA 提取 1、原理细胞裂解液中含有去污剂十二烷基硫酸钠（ SDS ），溶解细胞膜、核膜，破坏细胞并释放出来 DNA 。蛋白酶 K 是光谱蛋白酶，能在 SDS 和 EDTA 存

RNA 提取（一） 1）取出 -80 ℃保存样品，室温，溶解。 2）每 1ml Trizol 加 0.2ml 氯仿，强烈上下混匀，室温。静置 2-3min ，抽提 RNA 。 3）用超速低温离心机 4 ℃， 15000rpm, 离心 15min 。

2 组织样品处理（1）实验动物组织用手术刀切下 1g 左右，放在冰生理盐水或 PBS 液中洗去血液，滤纸吸去组织表面的水分。（2）小剪刀剪碎组织，加入 1.0-1.5ml Trizol ，组织研磨器或

1 细胞样品处理（1）6孔细胞培养板或35mm培养皿培养的细胞待70%-80%融合。 *悬浮细胞时，离心上清液收集细胞。（2）彻底弃上清液，每孔加0.5-1ml Trizol,混匀，室温放置5min使细胞充分裂

1、操作中戴口罩和手套 2、清洁无尘环境中操作，试验台、移液器要用 75% 乙醇擦拭消毒，也可使用 RNase 抑制剂，操作时避免大声喧哗和频繁走动。 3、玻璃器皿常规洗涤后，应用 0

分子生物学研究中要了解目的基因的存在和表达，可通过提取组织或细胞中的总 RNA 检测该基因的信使 RNA 。总 RNA 的构成是比较复杂，包括核内 RNA 和胞质 RNA ，此外 RNase 是一类活性非

生物大分子是构成生命的基础物质，主要活性成分的分子量达到上万或更多的有机分子，包括蛋白质、核酸、碳氢化合物等。分子生物学从分子水平研究核酸和蛋白等生物大分子的结构

抽提末再用氯仿处理，处理痕量的酚，然后用水饱和乙醚抽提一次，除去样品中痕量的酚和氯仿，最后 68 ℃水浴孵育 10min 挥发乙醚，便可获得纯净的核酸。获得核酸后，尚需要进行浓

一、实验设计的意义实验设计是科学研究计划内关于研究方法与步骤的一项内容。在医学科研工作中，无论实验室研究、临床疗效观察或现场调查，在制订研究计划时，都应根据实验的