链亲和素-生物素结合物免疫荧光标记实验
2016-05-25来源:未知
此实验方案介绍了一种经三步反应的技术,它通过使用链亲和素-第二抗体结合物,然后再与生物素-荧光染料结合物反应,提高了免疫组化反应的敏感度。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
3. 稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。
4. 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。
5. 以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
6. 稀释的生物素酰化第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片用40~50 μl抗体)。
8. 以PBS洗玻片3次(毎次洗15 min)加荧光染料-链亲和素于切片上(每一载玻片用40~50 μl 抗体)。置加湿盒中、室温温育1 h,以PBS洗玻片3次。
10. 显微镜下观察 结果,或置玻片盒中贮于4℃。
此文转载:丁香通