单层生长细胞的免疫荧光标记实验

2016-05-25来源：未知

免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。

实验材料

试剂、试剂盒

仪器、耗材

实验步骤

1. 置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。

2. 如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10~-20℃）固定15 min。

3. 吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。

4. 加第一抗体于培养皿中，使其恰好覆盖细胞，4℃温育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。

5. 稀释的笫二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。

6. 加第二抗体于细胞上，4℃温育4 h。然后用4℃PBS洗4次。

7. 若不想立即观察细胞，则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿，以铝箔包裹，冷藏，在24 h 内观察此实验结果是很重要的，因荧光会迅速减弱或与细胞解离。

此文转载：丁香通