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NorthernBlot--northern杂交

Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary, the formaldehyde concentration should be increase

Northern Blot原理及实验方法

原理:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途:检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含

RNA酶保护试验(RPA)

RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点: 1. 检测灵敏度比Northern杂交

核酸分子杂交的概念和基本原理

分子杂交的概念: 分子杂交(molecular hybridization)指具有一定同源序列的两条核酸单链(DNA或RNA),在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理,形成异质双链的过程。 利用这一原

双酶切连接反应常见问题分析

前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了很多次,不过很快改善了实验方法,用2周重组了14个质粒。现就自己的体会,谈一下质粒重组的一些个人经验。 1. 回收PCR产物: 在进行PCR扩

肝中DNA的分离和鉴定

[原理] 细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在,其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中,核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol/L氯化钠溶液中的溶解度相差很大,核

小鼠肝基因组DNA的制备

一、原理 DNA以核蛋白形式存在于细胞核中,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。

感受态细胞的制备的实验步骤

一、CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤 1.前夜接种受体菌(DH5α或 DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时); 2.取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上

苯酚/氯仿沉淀DNA

1. Add an equal volume (equal to sample volume) of P/C to sample. 2. Mix (shake, don't vortex). 3. Take aqueous (upper) layer. (If dirty sample, repeat Ph/Chl step until interface is fairly clean). 4. Add equal volume chloroform, mix (shake

筛选多肽的操作步骤

第一天 以0.1M NaHCO3(pH 8.6)制备100mg/ml的靶分子溶液。如果需要稳定靶分子,可以用含有金属离子的相似离子强度缓冲液。 在每孔内加入1.5ml靶分子溶液,重复涡旋直至表面完全湿润(

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