双萤光素酶报告基因检测(miRNA靶基因验证)实验三
2016-05-25来源:未知
4.实验步骤
实验共分以下3个主要步骤:
1. 质粒转染细胞;2.双报告基因检测;3. 统计学分析。
1.质粒转染细胞:
(1) 细胞铺板:将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。
(2) 转染:16小时后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA,每个样品设置6个复孔
1) 配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例Firefly:Renilla:转染试剂=0.1μg:0.01μg:0.25μl
2) 配制RNA和转染试剂稀释液,RNA的终浓度为100nM,转染试 剂每孔0.25μL
3) 稀释好的DNA和RNA及转染试剂,常温孵育5min
4) 将稀释好的DNA和RNA分别和转染试剂混匀,常温孵育20min
5) 每孔弃去50ul培养基,将25μL DNA转染混合液和25uL RNA转 染混合液分别添加到每孔细胞样品中,
6) 转染6小时后,换新鲜完全培养基
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