白细胞介素8（IL- 8）检测实验
2016-05-25来源：未知Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。
一、实验方法：夹心法ELISA
二、实验原理：采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
三、实验材料：抗体、标准品、ABTS
四、试剂、试剂盒：缓冲液、PBS
五、仪器、耗材：ELISA板
六、实验步骤：
1. 包被
pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。
2. 封闭
0.1 ％吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3 ％BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
3. 加待检样品
Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔，放37 ℃，3 小时。
4. 加酶标抗体
Buffer A冲洗96孔板五次，3 ％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
5. 显色
Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS)），0.2 mg/ml，加3 ％H2O2，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室温下或37 ℃显色。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
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