Giemsa染色方法的标准化操作

1、Giemsa染色

          1.根据需要量，取8ml双蒸水，加入姬姆萨原液1ml，再加入姬姆萨稀释液1ml，再加入姬姆萨稀释液1ml，混匀即为工作液，此工作液常温可保存两周。

          2、按常规方法将石蜡切片脱蜡水化，PBS清洗。

          3、将切片放到染色架上，滴加2-3滴染色工作液，使覆盖全部组织，室温染色15-30分钟。

          4、用自来水缓慢从玻片一端冲洗，晾干后镜检。

2.HE染色

         1. 脱蜡复水： 石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。

         2． 染色：切片放入苏木精中染色约10-30min。

         3．水洗：用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。

         4．分化：将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。

         5．漂洗：切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。

         6．脱水Ⅰ：切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3-5min。

         7、复染：用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。

         8．脱水Ⅱ：将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。

         9．透明：切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3-5min。

        10．封藏：中性树胶封存

3、固绿-番红O染色

        1.常规脱蜡至水

        2.入新鲜配制的Weigert染液染色5min.

        3.酸性乙醇分化液分化15s。

        4.蒸馏水洗1min。

        5.在固绿染色液内浸染5min，蒸馏水洗1min。

       6.入Safranin O stain内浸染2min，蒸馏水洗1min。

       7.用乙酸溶液洗涤切片1min，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。

       8.分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。