细胞因子生物学活性检测实验
细胞因子水平测定是细胞免疫功能检测的一个重要组成部分。由于许多细胞因子cDNA克隆和表达的成功,给细胞因子单克隆抗体制备、生物学功能的鉴定提供必要条件。
实验方法原理
白细胞介素1是一种重要的细胞因子,主要由单核-巨噬细胞产生,IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能,而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。
小鼠胸腺瘤细胞系EL4的某些亚克隆细胞表面具有高密度IL-1受体,在IL-1诱导下产生高水平的IL-2,通过用IL-2依赖株CTLL-2检测IL-2的生物学活性,从而反映检测样品中IL-1的水平。
试剂、试剂盒
FCS RPMI1640 3H-TdR PPO POPOP 二甲苯
仪器、耗材
滤纸 收集仪 计数仪 96孔板 吸管 滴管 试管 加样器 CO2培养箱
实验步骤
一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性
1. 取6~8 周龄C57BL16小鼠,拉颈处死,无菌取胸腺置不锈钢网筛上,用注射器针蕊研磨成细胞悬液调整细胞数为1.5×107 /ml
(1)从IL-1标准曲线上测得IL-1的活性单位
(2)也可用刺激指数(SI)表示
SI=────── ×100%
对照组cpm
(1)收集处于对数生长期的EL4细胞
2. 用EL4细胞一步法检测IL-1活性
(1)用5 %FCS RPMI 1640调整EL4细胞浓度至2×105 /ml,CTTL-2浓度至4×105 /ml
(3)加入不同稀释度的IL-1或待测样品,同时设EL4和CTLL-2细胞对照
(5)收集样品,β计数
一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性
3. ConA促丝裂原作用要进行预试,一般采用亚适剂量。
1. 在一步法检测IL-1时,其EL4细胞浓度不宜超过1×104 /孔,血清终浓度应<5%。
2. 在二步法检测IL-1时,其EL4细胞浓度在2×105 /孔时,转移上清稀释度不宜低于1∶8,其诱导时间应12~24 小时间为佳。诱导血清浓度应≤1%。
3. 在检测经诱导的上清中IL-1时,应避免使用A23187,TPA和ConA等较强的能诱导EL4细胞产生IL-2的诱导剂来刺激IL-1的产生。
此文转载来源:丁香通