器官培养实验
2016-05-25来源：未知
由于根据需要的器官培养技术需将组织放在理想的气体和营养物质交换的位置，故这残技术大多数是将组织放在半间体琼脂凝胶底物上 或凝 集 血 浆的气液界面卜.，或放在由不锈钢网支托的微孔滤膜、 擦 镜 纸 或 人 造 纤 维 的 筏 上，或 黏 附 到 有 机 玻 璃 或 树 脂 玻 璃 条上的气液界面。 目前用滤膜培养皿最容易获得这种几何形状。
无菌
1. 解剖器械
2. 含有或不含有血清的培养液（如 M199）
3. 非组织培养处理的滤膜培养皿（如 Costar Transwell 聚碳酸酯，#3423，Corning）
4. 12 孔的培养板（Corning）
非灭菌
1. 已受精的鸡蛋，孵育 8 d
二、操作步骤
1. 将滤膜培养皿放在多孔培养板的各个孔内，加入培养液直至达到滤膜底面水平（约 1 ml）。
2. 将多孔培养板放入湿润的 37°C 恒温 CO2 培养箱中，以调整培养液的 pH。
3. 准备组织或切出整个胚胎器官（如 8 d 鸡胚的股骨或胫骨；见方案 12.2 和方案 12.7）。在一个纬度，组织厚度必须不超过 1 mm，最好更小（如 8 d 胚的胫骨长度可能达 5 mm，但直径仅 0.5~0.8 mm。皮肤小块可为 10 mm2，但厚度仅为 200 μm。必须切成小块的组织不应大于 1 mm3，如肝或肾）。
4. 在短时间内解剖标本（＜ 1 h），HBSS 要充足。但是，较长时间解剖时应在以 HEPES 缓冲为 pH7.4 的 HBSS 中添加 50% 血清。
5. 从培养箱中取出多孔板，小心地将组织转移到滤膜上。这一步最好用 Pasteur 吸管完成，可同时吸出随组织块转移出的液体，应小心不要刺破滤膜。在吸取前，先用培养液湿润吸管内壁，以防止吸取时组织块黏到吸管壁上。
6. 检查培养液的水平，确认将组织浸湿，但没有完全浸没。然后，将培养板放回培养箱中。
7. 2~4 h 后再次检查，确保培养液面保持在滤膜和组织块之上，但深度不足以使组织块浮起。
实验方法原理 取出器官或组织，将其切成 1 mm3 小块或成薄膜状、杆状。然后，将组织放在位于气液界面的支持物上，如滤膜培养皿。在湿润的 CO2 培养箱中培养，根据需要更换培养液。
试剂、试剂盒 M199
仪器、耗材 解剖器械滤膜培养皿12 孔培养板受精鸡蛋
实验步骤
一、材料
无菌
1. 解剖器械
2. 含有或不含有血清的培养液（如 M199）
3. 非组织培养处理的滤膜培养皿（如 Costar Transwell 聚碳酸酯，#3423，Corning）
4. 12 孔的培养板（Corning）
非灭菌
1. 已受精的鸡蛋，孵育 8 d
二、操作步骤
1. 将滤膜培养皿放在多孔培养板的各个孔内，加入培养液直至达到滤膜底面水平（约 1 ml）。
2. 将多孔培养板放入湿润的 37°C 恒温 CO2 培养箱中，以调整培养液的 pH。
3. 准备组织或切出整个胚胎器官（如 8 d 鸡胚的股骨或胫骨；见方案 12.2 和方案 12.7）。在一个纬度，组织厚度必须不超过 1 mm，最好更小（如 8 d 胚的胫骨长度可能达 5 mm，但直径仅 0.5~0.8 mm。皮肤小块可为 10 mm2，但厚度仅为 200 μm。必须切成小块的组织不应大于 1 mm3，如肝或肾）。
4. 在短时间内解剖标本（＜ 1 h），HBSS 要充足。但是，较长时间解剖时应在以 HEPES 缓冲为 pH7.4 的 HBSS 中添加 50% 血清。
5. 从培养箱中取出多孔板，小心地将组织转移到滤膜上。这一步最好用 Pasteur 吸管完成，可同时吸出随组织块转移出的液体，应小心不要刺破滤膜。在吸取前，先用培养液湿润吸管内壁，以防止吸取时组织块黏到吸管壁上。
6. 检查培养液的水平，确认将组织浸湿，但没有完全浸没。然后，将培养板放回培养箱中。
7. 2~4 h 后再次检查，确保培养液面保持在滤膜和组织块之上，但深度不足以使组织块浮起。
8. 将组织培养 1~3 周，根据样本需要，每隔 2~3 d 更换培养液 1 次。
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来源：百度学术
