Alarmablue法检测细胞活力

一、材料
1.  Resazurin细胞活力检测试剂盒（Biotium，Inc.30025）
 
2.  细胞：在本试验中，使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。
（1）DU145（ATCC，HTB-81）
 
（2）PC3（ATCC，CRL-1435）
 
（3）LNCap（ATCC，CRL-1740）
 
二、仪器
1.  SpectraPLUS酶标仪
 
三、步骤
1.  标准曲线制备：
（1）在96孔板中加入100 μL 培养基，然后接种适量细胞，贴壁细胞控制在40~10 000/孔，悬浮细胞控制在2 000~500 000/孔。用100 μL 不加入细胞的培养基作为空白对照。
 
（2）在培养基中加入10 μL resazurin溶液，37℃过夜培养细胞（1~24小时）。
 
（3）使用微量酶标仪分别检测570 nm 和600 nm 下的吸光值。
 
（4）获得每一个样品的在OD570和OD600下的吸光值，制作标准曲线来确定试验中的最适细胞浓度。
 
2.  细胞活力分析：
（1）选择最适的细胞浓度，使用96孔板进行细胞培养。对于人类前列腺癌细胞DU145，PC3andLNcap，经常使用的浓度是2 000-5 000/孔。
 
（2）根据你设计的试验，在对应的孔中加入相应试剂对细胞进行处理一段时间。
 
（3）在培养基中加入10 μL resazurin溶液，37℃过夜培养细胞（1-24小时）。
 
（4）使用微量酶标仪分别检测570 nm 和600 nm 下的吸光值。
 
（5）获得每一个样品的在OD570和OD600下的吸光值，区分处理的样品和对照样品的吸光值，将对照样品的吸光值设置为100%来计算处理后细胞的活力。
 
（6）细胞活力=（检测样品的OD值）/（对照样品的OD值）x100%

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