GTP酶研究新工具（一）[新品推荐]

      GTP酶是一个水解酶的大家族，它们能够结合并水解三磷酸尿苷（GTP）。GTP结合与水解是在所有GTP酶共有的高度保守G结构域中发生的。GTP酶在信号转导、蛋白生物合成、蛋白转位以及囊泡运输上都扮演了重要角色。

异三聚体GTP酶通常与G蛋白偶联受体（GPCR）结合，有着不同的信号异构体，来确定受体信号。小GTP酶超家族包含数百个蛋白，它们可进一步细分成Ras、Rho/Rac、Rab、Arf和Ran家族。这些单体GTP酶在细胞内信号事件中起着分子开关的作用，这要取决于它们是与GTP结合，还是与GDP结合。

      为了研究GTP酶的活性，赛默飞世尔科技公司推出了一系列产品。生物通今天要介绍的是Thermo Scientific Pierce GTP酶富集试剂盒（Thermo Scientific Pierce GTPase Enrichment Kit）。顾名思义，它可选择性标记并富集小GTP酶和G蛋白大亚基。试剂盒提供的试剂广泛适用于组织、细胞以及亚细胞蛋白质组中GTP结合蛋白的富集。

      Pierce GTP酶富集试剂盒由新型的脱硫生物素-核苷酸探针技术拓展而来，该技术也应用于Thermo Scientific新近推出的激酶富集试剂盒。核苷酸与脱硫生物素相结合，后者是由ActivX Biosciences开发的生物素的类似物。核苷酸与GTP结合蛋白的活性位点结合，利用脱硫生物素标签，即可进行针对其结合的蛋白进行捕获和富集。与生物素和蛋白的结合相比较，脱硫生物素结合的力量较弱，当使用生物素替换、低pH或加热时，脱硫生物素与被捕获的蛋白能够轻松分离。

      若想研究抑制剂结合亲和力和目标特异性，可将样品与小分子抑制剂预先孵育。活性位点的标记可通过Western blot或质谱来分析（下图）。对于Western blot流程，脱硫生物素标记的蛋白富集后，可开展SDS-PAGE分析，进而检测。对于质谱流程，脱硫生物素标记的蛋白被还原、烷基化并消化成肽段。两个流程都可确定抑制剂目标的结合，但只有质谱流程能够鉴定出整体的抑制剂目标和脱靶。

      通过质谱流程，研发人员鉴定出超过500种活性位点肽段，对应了G蛋白大亚基和小GTP酶家族的66种不同的GTP酶（下表）。通过这种方法生成的蛋白质组目标列表可实现多个细胞和组织类型中GTP酶表达的比较。

      Pierce GTP酶富集试剂盒包括所有的标记和富集所需的试剂，包括ActivX GTP探针，足够16次富集使用。探针也可单独购买。

此文转载来源：生物通