RNA 在甲酰胺中的溶解保存
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一材料与设备
所有的试剂配制均需采用经过蒸馏并消毒的去离子水。
1) 无水乙醇
2) 异丙醇
3)75% 的乙醇
4)100% 甲酰胺
5)3mol/L 的乙酸钠
6) 高速离心机
7) 紫外分光光度计
二操作方法
1) 使用 CsCl 法,酸-苯酚法,TRIol 法或 RNaolB 法进行 RNA 的一步提取。
2) 用无水乙醇 (CsCl 法)或异丙醇 (其他方法)沉淀 RNA, 离心获得 RNA 沉淀。
3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的盐分。
4) 晾干,尽量吸去乙醇,并确保 RNA 中没有多余的乙醇存在。
5) 用保存的 100% 甲酰胺重悬 RNA。甲酰胺的用量应视 RNA 沉淀的多少而定,通常用量在 10ul 到 1000ul 之间。
6) 大部分的 RNA 可立即溶解,可以在室温放置 15 min,并用吸头不时的上下吹打液体,以促进 RNA 的溶解。如果 RNA 的浓度很高,可以在 4℃ 放置过夜,以促进其完全溶解。
7) 定量时,将 1ul RNA 溶液稀释到 500ul 水中,测量其 OD260 值
8) 如果样品被过分稀释了,可以像水溶的 RNA 样品一样进行乙醇沉淀浓缩,加水溶解后使用。
注意事项
1)当使用 CsCl 法进行 RNA 的提取时,更应注意 RNA 多余盐分的去除。
2)“操作方法”第4)步中,RNA 不要过分干燥。
3)测量 RNA 的 OD 值时,应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺,以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景
此文转载:丁香通