核酶切割 RNA 专一位点

      核酶是获得长片段 RNA 特定位点切割产物的有用工具，可用于研究 RNA 修饰，修饰位点分析，以及获得具布不间长度末端的 RNA 转录产物。

实验材料

      合成的核酶分子    切割底物RNA

试剂、试剂盒

      Tris-HCl   MgCl2

实验步骤

一、材料与设备

      1)500 mmol/LTris-HCl(pH7.4)

      2)100 mmol/LMgCl₂

      3) 合成的核酶分子

      4) 切割底物 RNA


二、操作方法

      1) 制备切割混合构：不超过 l0 pmol 底物 RNA，l pmol 合成的核酶分子，加水至 8ul, 加 l ul 500 mmol/L Tris-HCl(PH7.4)，混匀。

      2) 于 75℃ 加热 1 min, 然后置于冰上。

      3) 加 1ul 100 mmol/L,MgCl₂ 于 42℃ 孵育 lh。

      4) 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，回收。

注意事项

      1) 切割底物 RNA 和核酶可以通过体外转录的方式获得。

      2) 切割底物 RNA 要与核酶匹配，若底物与核酶具较长的碱基配对则可以提髙酶切的特异性，但会降低切割转换数，因此一般选择 5-7 个核苷酸作为互补匹配区。

      3) 为获得最佳的切割效果，底物 RNA、核酶的用量，镁离子的浓度、反应温度和反应时间均应通过试验确定。

此文转载：丁香通