基因敲入及基因敲入小鼠

基因敲入(Knockin)是根据实验要求，在目的基因位置引进特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)；或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，Thy1.1或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因的表达跟踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因，使敲除/敲进同时发生。

服务流程

A. 打靶载体构建：（1-2个月）

包括：基因结构分析、筛选策略设计、探针设计/构建和证实、打靶载体构建（体内重组工程）、核实（同源臂、Neo原件盒、报告基因）、制备电转用DNA；Southern杂交探针设计和优化。

B. ES细胞培养和电转（2-3周）

  ES细胞的培养和将打靶载体电转进ES细胞。

C. 阳性克隆的分离和筛选（3-5周）

通过PCR和Southern杂交对抗生素抗性ES细胞和阳性ES细胞的筛选；

对阳性ES细胞进行核型分析；

D. 阳性ES细胞扩大培养和显微注射（2-3个月）

 将核型正确的阳性ES细胞显微注射/转移到囊胚中，将囊胚植入代孕母鼠，嵌合体小鼠的出生

E.  嵌合体小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配得到F1代小鼠，通过基因型检测确认得到杂合子（2-3 月） 。

F. 小鼠运输。

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