人脐动脉平滑肌细胞培养实验

人脐动脉平滑肌细胞培养可以：（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；（2）作为重大动脉疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。

消化法

实验方法原理         

运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

实验材料         

脐带

试剂、试剂盒         

胶原酶消化液胰蛋白酶胶原酶弹性蛋白酶DMEM

仪器、耗材     

眼科剪滴管离心机培养皿 CO2培养箱

实验步骤   

     

一、实验步骤

 

1.  冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。

 

2.  用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10 次。

 

3.  加入 10 倍体积无菌胶原酶消化液(1  mg/mL)，室温消化30 min，1000 rpm离心 5 min，弃上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次离心5 min，弃上清。

 

4.  加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次离心5 min，弃上清。

 

5.  加胶原酶(1 mg/mL)弹性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再离心5 min，弃消化液。

6.  加混合消化液 37℃消化 20 min，再次离心 5 min，细胞加含 10% FBS的DMEM培养基重悬，转入培养皿 37℃、5% CO2培养箱中培养即可。

 来源：丁香通