poly(A)+ RNA的制备实验
2016-05-25来源:未知
大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带poly(A)的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。
基本方案
实验材料: RNA
试剂、试剂盒: NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly(A)样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠
仪器、耗材: 离心机分光光度计摇床
实验步骤
1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。
2. 取0.5 g oligo(dT)纤维素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中,倒入柱内,以约10 ml 水冲洗。
3. 用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子,至流出液pH约7.5。
4 于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min,再用10 mol/l LiCl调节溶液中LiCl至终浓度0.5 mol/l。
5. 加RNA溶液至oligo(dT)柱,并以1 ml poly(A)加样缓冲液洗涤,将流出液重新上柱2次以上。
来源:丁香通