蛋白质检测
2016-05-25来源:未知
蛋白印迹法
四 转膜
操作步骤:
1 准备:切好的PVDF膜和滤纸置于甲醇5min,PVDF膜置于电转缓冲液浸泡10min以上。
*转一张膜需6张6cm×9cm滤纸和1张6cm×9cmPVDF膜,滤纸和膜的尺寸不能小余胶的尺寸,否则导致电流不能通过膜。切滤纸和膜时一定要戴手套,因手上的蛋白会污染膜。
2 加有转膜液搪瓷盘中放入转膜用的已浸过的PVDF膜和滤纸。
3 电泳结束后撬掉玻璃板取胶,除去小玻璃板,轻轻刮去浓缩胶。
4 小心剥下分离胶盖于已泡好的滤纸上。
5 200V电压,160mA稳流电,转膜1h。
6 转完后将膜和滤纸扔掉,PVDF膜右上角用剪子切断一小部分进行标记,Marker用红蓝铅笔进行标记。
7 PVDF膜放入PBS-T溶液,振荡5min×3次。