质粒的制备、提取
2016-05-25来源:未知
启动子质粒
一、操作前准备
1. 仪器设备
PCR仪、37℃恒温培养箱、37℃恒温摇床、水浴锅、超净工作台、高速离心机等等。
2. 试剂
过表达载体质粒(pGL3-Basic等)、限制性内切酶、胶回收试剂盒、感受态大肠杆埃希菌DH5ɑ、质粒提取试剂盒等等。
二、菌落制备主要环节
(一)扩增Lin28A启动子
1. 以HepG2基因组DNA为模板,扩增Lin28A启动子,长度1480bp。
引物:
上游引物:5′-CCGCTCGAGGGTGGTTACTCTCAAACAAGG-3′
下游引物:5′-CCCAAGCTTCAGAGACTCACGGCGGGACAAG-3′
分别在上下游引物上引入XhoI/Hind Ⅲ内切酶位点。
2. PCR产物回收
* 依照琼脂糖凝胶回收试剂盒操作进行。