身经百战之裸鼠皮下成瘤常见问题解答！

医学上通常用裸鼠成瘤实验来研究肿瘤及其治疗：用带有人源移植瘤的裸鼠来试可能的靶向药物，可以在肿瘤复发之前都找到真正有效的靶向药物。裸鼠成瘤实验，即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。
             
      今天中洪菌以Hep-G2细胞为例，介绍裸鼠皮下成瘤的实验小技巧及问题解答！

      一、接种步骤
      1、  接种是选好进针部位，大部分选择腋下接种，接种前用75%的酒精对进针部位擦拭消毒。

      2、  排去一次性针头内空气，从进针部位向前穿刺大约1cm，进行皮下注射。

      3、  注射时，每次注射量大约为0.2ml，每日观察。

      4、  注射完毕后，缓慢退出针头，尽量避免漏液；

      5、 注射过程中，细胞需一直置于冰上，使细胞处于比较低的代谢状态，并尽量在半小时内完成。

      实验结果：一般接种7-10天后便可看到肿块长起；

     二、操作小技巧
     1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基；

     2、注射向前方穿行，注射前针头稍微动一动，能动说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内；

     3、注射前，要排去针管内的空气；

     4、针头在皮下走一段再注射，速度不可太快

     5、接种点离进针点尽量1cm远，减少漏液和污染的可能；

     三、常见问题及解答
     1、这个实验为什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？

     裸鼠成瘤实验用的裸鼠，最大的特点是没有胸腺等免疫器官，它的免疫力几乎为０，对肿瘤细胞没有免疫作用，易于成瘤。

     自然状态下的老鼠和小白鼠有完整的免疫系统。免疫系统有免疫防御、免疫自稳、免疫监视三大生理功能，并通过免疫识别和免疫排斥攻击两大生理反应起作用。具有完整免疫系统的老鼠和小白鼠，会通过免疫识别反应来识别自己与非己，发现注入的肿瘤细胞这种非己抗原后，会启动免疫排斥攻击反应进行杀灭，这样肿瘤就很难形成，实验就难以进行下去。

     2、小鼠瘤子长起来又消失？

     肿瘤块先缩小，后变大很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，长不起来建议换鼠。

     3、如何抓牢裸鼠?

     可以用左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴，然后进行接种。

     4、是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤？

     不可以，一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

     5、肿瘤长不出来是怎么回事？

     第一：肿瘤生长周期很慢，一周开始生长肿块，大约需要1~2个月才能长成肿瘤。
     第二：可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系；
     第三：一方面可能是小鼠周龄太大，或小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）

     6、肿瘤体积相差很大，大小不一？

     首先，不是所有的肿瘤都能够长得均一形态规则。
     其次，荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议重新做实验分组。
     最后，一般构建肿瘤模型，裸鼠主要保证周龄，周龄小一点好。

     总之，裸鼠成瘤概括来说就是，大胆的接种，勤观察，勤记录，一定要仔细记录！

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