TRIzol法提取DNA、RNA、蛋白质时常见问题

TRIzol法提取DNA、RNA、蛋白质时我们常会遇到以下问题

一、DNA的分离常见问题
得率低：
　　A.样品匀浆和裂解的不彻底。
　　B.最终得到的DNA沉淀没有完全溶解。
A260/A280<1.70 ：
　　A. 检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。
　　B.酚除去的不彻底，可用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）再洗一遍DNA沉淀。
DNA降解：
　　A.组织取出后没有马上处理或冷冻。
　　B.待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃。
　　C.样品匀浆时使用了高速匀浆仪。
RNA污染：
　　A.氯仿分层后水相去除的不干净。
　　B.DNA沉淀用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）洗的不彻底。

二、RNA的提取常见问题
得率低：
　　A.样品裂解或匀浆处理不彻底。
　　B.RNA沉淀未完全溶解。
A260/A280<1.65 ：
　　A.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高。
　　B.样品匀浆时加的试剂量太少。
　　C.匀浆样品时未在室温放置5分钟。
　　D.吸取水相时混入了有机相。
　　E.RNA沉淀未完全溶解。
RNA降解：
　　A.组织取出后没有马上处理或冷冻。
　　B.待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃。
　　C.细胞在用胰酶处理时过度。
　　D.溶液或离心管未经RNase去除处理。
　　E.电泳时使用的甲醛pH值低于了3.5 。
DNA污染：
　　A. 样品匀浆时加的试剂量太少。
　　B.样品中含有有机溶剂（如乙醇，DMSO等），强缓冲液或碱性溶液。
蛋白聚糖和多糖污染：
　　沉淀RNA的过程中作以下改进可去除这些污染，步骤7中，每使用1ml TRIzol在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液（0.8M柠檬酸钠和1.2MNaCl）混合离心，按之前操作进行。这种方法可使蛋白聚糖和多糖留在溶液中，高效沉淀出纯RNA。从含有大量多糖的植物中提取RNA时应在匀浆后离心，并加上以上操作步骤。

      三、蛋白质的提取
常见问题分析：
得率低：
　　A.样品裂解或匀浆处理不彻底。
　　B.最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解。
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻。
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。

想要了解更多请关注：http://www.chinazglab.com/index.html