蛋白质检测五

蛋白印迹法

四 转膜

      操作步骤：

      1.准备：切好的PVDF膜和滤纸置于甲醇5min，PVDF膜置于电转缓冲液浸泡10min以上。

      2.转一张膜需6张6cm×9cm滤纸和1张6cm×9cmPVDF膜，滤纸和膜的尺寸不能小余胶的尺寸，否则导致电流不能通过膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因手上的蛋白会污染膜。

      3.加有转膜液搪瓷盘中放入转膜用的已浸过的PVDF膜和滤纸。

      4.电泳结束后撬掉玻璃板取胶，除去小玻璃板，轻轻刮去浓缩胶。

      5.小心剥下分离胶盖于已泡好的滤纸上。

      6.200V电压，160mA稳流电，转膜1h。

      7.转完后将膜和滤纸扔掉，PVDF膜右上角用剪子切断一小部分进行标记，Marker用红蓝铅笔进行标记。8.PVDF膜放入PBS-T溶液，振荡5min×3次。

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