血清总胆固醇的测定实验
实验方法原理
用无水乙醇提取血清中的胆固醇,同时沉淀蛋白质,向提取液中加入硫磷铁显色剂,胆固醇与浓硫酸及三价铁作用,生成稳定的紫红色化合物。与同样处理的标准样进行比色,求得其含量。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
溶液配制:
1. 胆固醇标准贮存液(1 ml中含1.0 mg):精确称取干燥重结晶胆固醇100 ml,溶于无水乙醇内(因不易溶解,可稍加温助溶),然后移入100 mg容量瓶中,加无水乙醇至刻度,贮于棕色瓶中,密塞瓶口置4 ℃冰箱中。配应用液时,应将其预先恢复至室温。
2. 胆固醇标准应用液(1 ml中含0.04 mg):取上述贮存液4 ml 于100 ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至100 ml刻度,贮存于棕色瓶中,放冰箱保存,使用时应先恢复至室温。
3. 铁贮存液:称取六水三氯化铁2.5 g,溶于87%磷酸内,并磷酸加至100 ml,贮存于棕色瓶中,此液在室温中可长期保存。
4. 显色剂:取铁贮存液8 ml,加浓硫酸至100 ml,此液在室温可保存6~8周。
操作步骤:
1. 取小试管1支,准确吸取0.1 ml 血清于管底,加入无水乙醇4.9 ml,混匀,静置10 min,以2000 r/min 离心10 min。吸取上清液置另一洁净的小试管中备用。
2. 另取3支大试管标明“测定”、“标准”和“空白”并按下表配制。
3. 计算
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